Aislamiento y caracterización de células mesenquimales derivadas de tejido adiposo / Isolation and characterization of mesenchymal cells from adipose tissue

Introducción : Existe un creciente interés científico en el potencial terapéutico de las células madre mesenquimales derivadas de tejido adiposo ( ADSCs, en inglés). Estas células son abundantes en el tejido adiposo, son de fácil obtención y con un alto potencial de diferenciación hacia linajes celulares especializados incluyendo adipocitos, osteocitos, condrocitos, miocitos, cardiomiocitos, tenocitos, vasos sanguíneos y neuronas. Este trabajo se desarrolló con el objetivo de implementar en el laboratorio un procedimiento para aislar y cultivar ADSCs, con características que corresponden a las informadas para este linaje celular. Método: los precursores de células adiposas humanas se obtuvieron de tejido subcutáneo abdominal. Las células se separaron enzimáticamente del tejido y se decantaron por centrifugación, luego de cultivadas, se caracterizaron en su capacidad de diferenciación y por su marcadores fenotípicos. Resultados: Las ADSCs aisladas se replicaron en estas condiciones de cultivo y mantuvieron un fenotipo estable durante todo el período de estudio. Se comprobó su potencial adipogénico y osteogénico in vitro, como corresponde a las células madre mesenquimales. El estudio por citometría de flujo mostró que estas células expresan CD73, CD90 y CD105 y son negativas para los marcadores de linaje hematopoyético CD34 y CD45.En los ensayos de inhibición in vitro, las ADSCs demostraron su capacidad para inhibir la proliferación de células T humanas. Conclusiones : La caracterización fenotípica y funcional de las ADSCs obtenidas a partir del tejido adiposo abdominal demuestra que es posible la obtención mediante cultivo in vitro de células mesenquimales humanas sin inducir diferenciación espontánea, manteniendo su integridad funcional y altos niveles de proliferación, lo que sienta las bases para el inicio de ensayos preclínicos y su uso futuro en la terapia celular en nuestro país(AU)

Introduction : There is growing scientific interest in the therapeutic potential of stem cells derived from adipose tissue (ADSCs). These cells are abundant in adipose tissue, are readily available and have a high potential fordifferentiation into specialized cell lineages including adipocytes, osteocytes, chondrocytes, myocytes, cardiomyocytes, tenocyte, endothelial cells and neurons. The aim of this work was to isolate, cultivate andcharacterize ADSCs. Methods : human adipose precursor cells were obtained from abdominal subcutaneous tissue. Cells were enzymatically separated from the tissue and decanted by centrifugation, cultured and finally analyzed. Results : The ADSCs were able to replicate in our culture conditions. The cells maintained their phenotype in different passages throughout the study period, confirming its feasibility for in vitro culture. Also the ADSCs were induced to adipogenic and osteogenic differentiation, verifying its potential as mesenchymal stem cells in vitro. The flow cytometric study showed that these cells expressed CD73, CD90 and CD105 (markers of mesenchymal cells) and they were negative for CD34 and CD45 (hematopoieticcell markers). The ADSCs were able to inhibit in vitro the proliferation of T cells. Conclusions : It is possible to obtain ADSCs by in vitro cultivation without adipogenic induction, maintaining its functional integrity and high proliferation; this cell could be an important tool for the cellular therapy in our country(AU)

Sangramiento digestivo asociado al tratamiento con filgrastim: efecto secundario infrecuente / Digestive bleeding associated to treatment with filgrastin: infrequent adverse side effect

El factor estimulante de colonias granulocíticas (FEC-G), Filgrastim, es utilizado cada día con mayor frecuencia como agente movilizador para la obtención de concentrado de células progenitoras de sangre periférica. Generalmente, la movilización con FEC-G es bien tolerada aunque se ha reportado un amplio espectro de reacciones adversas asociadas a su uso, que incluyen: cefalea, poliartralgia y mialgia entre las más comunes. Ocasionalmente se han comunicado epistaxis y hemorragia retiniana. Los fenómenos tromboembólicos, el distrés respiratorio, la ruptura esplénica, la hemorragia intracraneal son algunos de los efectos secundarios rara vez comunicados. Las manifestaciones digestivas como náuseas y vómitos son frecuentes, no así los sangramientos del tracto digestivo...

Radiosinoviortesis con suspensión de fosfato crómico [32p] en pacientes hemofílicos / Synoviorthèse radio-isotopique à phosphate chromique chez les patients atteints d'hémophilie / Use of radiosynoviorthesis with chromic phospate suspensión in hemophilic patients

Introducción: la hemofilia se define como una anomalía congénita, ligada al cromosoma X. Este hecho determina que se manifieste en varones, mientras que las mujeres son solo portadoras de la enfermedad. Objetivo: evaluar la seguridad y efectividad de la radiosinoviortesis con fosfato crómico marcado con [32P] producido por el Centro de Isótopos, en la sinovitis crónica del paciente hemofílico. Métodos: se incluyeron aquellos pacientes que presentaban más de tres hemartrosis en un mes. Previo consentimiento de los pacientes, se les inyectó 1 mCi del isótopo en la articulación afectada. Fue monitoreada la migración del radiofármaco 10 min después del proceder y en los días 1, 7 y 30 posteriores al tratamiento. También se realizaron estudios hematológicos y citogenéticos antes del tratamiento y un año después de este. Se determinó la frecuencia de sangrado, el dolor y el consumo de factor antihemofílico. Fueron tratadas 10 rodillas en 9 pacientes (hemofilia A, 88,9 por ciento y hemofilia B, 11,1 por ciento). La edad media de los enfermos fue de 36,3 años con un rango entre 23-59 años. Resultados: no se observó fuga articular significativa, ni cambios hematológicos. El estudio cromosómico fue normal en los pacientes estudiados. Antes de la radiosinoviortesis con 32P, los pacientes presentaron una tasa de sangrado de 10,3 veces por mes (rango 7-13, SD ± 2,2). La frecuencia de sangrado después de realizado el proceder disminuyó a 0,8 (P< 0,0001) en los 12 meses posteriores a la radiosinoviortesis (rango 0-4, SD ± 1,23). Conclusiones: la radiosinoviortesis con fosfato crómico es un procedimiento seguro y efectivo en la sinovitis crónica del paciente hemofílico(AU)

Introduction: hemophilia is defined as an X chromosome-linked congenital anomaly that mainly occurs in males whereas females just carry the disease. Objective: to evaluate the safety and the effectiveness of radiosynoviorthesis using 32P chromic phosphate manufactured by CENTIS to treat the chronic synovitis in hemophilic patients. Methods: the patients who presented with more than three hemarthoses in a month were included in the study. After the patients' consent, they were injected 1 mCi of the radionuclide in the affected joint. The migration of the radiopharmaceutical was then monitored 10 minutes after the procedure as well as 1, 7 and 30 days following the treatment. Hematological and cytogenetic studies were also performed before and one year after the treatment. The bleeding frequency rate, pain and the consumption of anti-hemophilic factor were determined. Ten knees from 9 patients received this therapy (hemophilia A in 88.9 pecent and hemophilia B in 11.1 percent). The average age of patients was 36.3 years, with a range of 23 to 59 years. Results: there was neither significant joint leakage nor hematological change. The chromosomal study yielded normal values. Before the radiosynoviothesis with 32P, the patients exhibited a bleeding frequency rate of 10.3 times a month (range 7-13, SD ± 2.2), but this rate lowered to 0.8 (P< 0.0001) within the 12 months after the procedure (range 0-4, SD ± 1.23). Conclusions: radiosynoviorthesis with chromic phosphate is a safe effective procedure to treat chronic synovitis in the hemophilic patient(AU)

Introduction: l'hémophilie est définie comme une anomalie congénitale associée au chromosome X. Ce sont donc les hommes qui se rendent malades, tandis que les femmes ne sont que porteuses de la maladie. Objectif: le but de ce travail est d'évaluer la sécurité et l'efficacité de la synoviorthèse radio-isotopique (SRI) à phosphate ( 32P) chromique (produit par le CENTIS, La Havane, Cuba) chez les patients hémophiliques atteints de synovite chronique. Méthodes: les patients ayant plus de trois hémarthroses en un seul mois ont été inclus dans cette étude. Avec le consentement préalable de chaque patient, 1 mCi de cet isotope a été injecté dans l'articulation affectée. On a commencé à surveiller le trajet du radio-isotope 10 min après le procédé, ainsi qu'aux 1e, 7e, et 30e jours. On a également réalisé des tests hématologiques et cytogénétiques avant et après un an de traitement. Les fréquences de l'hémorragie, de la douleur et de l'administration du facteur anti-hémophilique ont été déterminées. Neuf patients (10 genoux) ont été traités (hémophilie A, 88.9 pourcent et hémophilie B, 11.1 pourcent). L'âge moyen des malades a été 36.3 ans avec un rang de 23-59 ans. Résultats: on n'a observé ni fuite articulaire significative ni changements hématologiques; le test chromosomique des patients étudiés a été normal. Avant la SRI à 32P, les patients ont présenté un taux d'hémorragie de 10.3 fois par mois (rang de 7-13, DS ± 2.2). La fréquence de l'hémorragie après le procédé a diminué à 0.8 (P< 0.0001) en 12 mois (rang de 0-4, DS ± 1.23). Conclusions: la SRI à phosphate chromique est une technique sure et effective pour le traitement de la synovite chronique du patient atteint d'hémophilie(AU)

Dr. Gustavo Pittaluga Fattorini. In memoriam

El doctor Gustavo Pittaluga Fattorini, sabio tropicalista, hematólogo y humanista de prestigio universal, vivió los últimos 14 años de su vida entre nosotros como exiliado político antifascista y durante su estancia en Cuba nos dejó el fruto de su gran talento. Desarrolló durante este tiempo una labor científica y cultural de indiscutible relieve, avalada por la publicación de libros, así como varios centenares de artículos, conferencias en periódicos y revistas del país o dictadas en prestigiosas instituciones nacionales. En el desempeño de su cátedra, el estudio de las enfermedades parasitarias como el paludismo, obligó al profesor Pittaluga a un mejor conocimiento de los elementos sanguíneos; de ahí que promoviera la creación de un servicio especial orientado a ese fin y como consecuencia de esos estudios llegara a convertirse en uno de los primeros hematólogos del mundo y fundara una Escuela Española de Hematología donde se formaron investigadores de gran talla que junto a su Maestro dieron gloria a la Medicina hispana.

Dr.Gustavo Pittaluga Fattorini (1877-1956), was a wise renowed tropicalist hematologist and universal humanist who lived the last fourteen years of his life among us as a political exile antifascist. During his stay in Cuba he left the fruit of his talent. He developed an outstanding scientific and cultural work of unquestionable highlight supported by the publication of books and hundreds of articles and lectures in newspapers and magazines of the country and prestigious institutions. During the performance of his chair,the study of parasitic diseases such as malaria led him to a better understanding of blood elements. Therefore he promoted the creation of a special service geared towards this purpose and as a result of his studies he became one of the world's top hematologists and contributed to the creation of a Spanish school where great Hematology researchers along with their Master formed and gave glory to the Hispanic Medicine.

Impacto del tratamiento con células madre adultas en la osteoartrosis de la rodilla / Impact of the treatment with adult stem cells in knee osteoarthrosis

Introducción: la osteoartrosis de la rodilla (OAR) es la causa más frecuente de artritis en la población por encima de los 55 años de edad. A menudo se asocia con discapacidad y deterioro variable de la calidad de vida. En la actualidad, el tratamiento con células madre ha abierto una alternativa más dentro del arsenal terapéutico con que se cuenta. Objetivo: evaluar la eficacia y seguridad del autotrasplante de células madre adultas en el tratamiento de la osteoartrosis de rodilla. Métodos: se realizó un estudio desde mayo 2009 hasta diciembre 2011, en el que se incluyeron 123 pacientes adultos con OAR atendidos en la consulta de medicina regenerativa, que no respondían a los tratamientos convencionales. Se les realizó el implante intrarticular de células mononucleares de sangre periférica (CMN-SP) autólogas, movilizadas mediante el factor estimulante de colonias granulocíticas. En todos los casos prevalecía el dolor y la dificultad a la marcha al inicio del tratamiento. Resultados: a los seis meses se observó mejoría clínica y radiológica en 117 pacientes (95,1 por ciento) y solo en seis enfermos (4,9 por ciento) no hubo la respuesta deseada, coincidiendo estos con los que presentaron trastornos de alineación marcados, en los cuales el dolor no desapareció, pero sí existió modificación de la intensidad. Conclusiones: el implante de CMN-SP es un método factible, simple, seguro y menos costoso para el tratamiento de OAR. Se recomienda que si existe deformidad angular acentuada marcada, esta debe corregirse antes del implante para que el proceder sea exitoso

Introduction: osteoarthrosis an every day more frequent degenerative disease affecting the quality of life of people over 55 years old and its treatment is a great challenge. The use of stem cells has open a new alternative in the available therapeutic arsenal. Objective: to assess the efficacy and safety of autologous adult stem cell transplantation in the treatment of knee osteoarthrosis. Methods: the study took place from May 2009 to December 2011 in 123 adult patients with OAR from the regenerative medicine outpatient service who had no response to conventional treatments. Intra-articular implantation of autologous peripheral blood mononuclear cells (MNC-SP) mobilized by granulocyte colony stimulating factor was performed. In all cases pain and gait difficulty at baseline prevailed. Results: after six months, clinical and radiological improvement in 117 patients (95,1 percent) were observed and only in six patients (4,9 percent) the expected response was not obtained. These last patients presented marked alignment disorders and the pain did not disappear, but there was a positive change in its intensity. Conclusions: the CMN-SP implant is a feasible, simple, safe and less expensive method for the treatment of knee osteoarthrosis. It is recommended that in cases with marked angular deformity, this disorder should be corrected prior to MNC-SP implantation so the procedure be successful

La medicina regenerativa y sus vínculos con la medicina del deporte / Regenerative medicine and its links with sports medicine

El objetivo fundamental de la medicina regenerativa es el desarrollo de nuevos métodos terapéuticos útiles para el reemplazo o reparación de tejidos, o bien para la promoción de su regeneración. Con estos métodos se han obtenido resultados muy prometedores en las alteraciones traumáticas y ortopédicas, tanto con el uso de células madre, fundamentalmente adultas, como con la utilización de plaquetas. La similitud de algunas de estas alteraciones con las atendidas por los médicos del deporte en atletas con lesiones secundarias a su entrenamiento o a su participación deportiva, ha hecho que estos procederes hayan creado buenas perspectivas en el campo de la Medicina del Deporte, pues se consideró que ellos podrían ser también de gran beneficio en el tratamiento de los deportistas lesionados. Hasta hace poco, el uso intramuscular de las plaquetas estaba totalmente prohibido por las autoridades deportivas, que consideraban este proceder una forma más de dopaje. Sin embargo, teniendo en cuenta que las inyecciones de plaquetas con fines terapéuticos no violan el espíritu del deporte, en el 2011 se eliminó esta prohibición. En la actualidad, el uso de las células madre con fines terapéuticos tampoco está incluido en la lista de prohibiciones de la Asociación Internacional Anti-Doping. Tomando en consideración estas decisiones, se estableció un convenio entre el Instituto de Medicina del Deporte y el Instituto de Hematología e Inmunología para dar los primeros pasos para la aplicación de estos novedosos métodos en la Medicina del Deporte

The main goal of regenerative medicine is the development of new therapeutic methods useful for the replacement or repair of tissues or to promote its regeneration. These methods have achieved promising results in trauma and orthopedic disorders, mainly with the use of adult stem cells, but also with the use of platelets. The similarity of some of these disorders with those seen by sports doctors in athletes with minor injuries due to their training or sports participation, have allowed these procedures to develop good perspectives in the field of sports medicine, as it was considered that they may also be of great benefit in the treatment of sports injuries. Until recently, the intramuscular use of platelets was completely forbidden by sports authorities who considered this approach another source of doping. However, taking into account that platelet injections for therapeutic purposes do not violate the spirit of sport, in 2011 the prohibition was removed. Currently, the use of stem cells for therapeutic purposes is also not included in the prohibited list of World Anti-Doping Agency. Considering these decisions, an agreement was established between the Institutes of Sports Medicine and Hematology and Immunology, in order to take the first steps to implement these new methods in Sports Medicine

Caracterización fenotípica de las células madre de médula ósea utilizadas en la terapia celular regenerativa / Phenotypic characterization of the bone marrow stem cells used in regenerative cellular therapy

La Medicina Regenerativa es una novedosa terapéutica de amplio potencial en diferentes enfermedades para la cual se utilizan células madre procedentes de la médula ósea (MO), cuya caracterización fenotípica es limitada. En nuestro trabajo se estudió la expresión de diferentes marcadores de la membrana celular en células mononucleares (CMN) de la MO de 14 pacientes a quienes se les realizó terapia celular autóloga, obtenidas por punción medular y movilización a la sangre periférica, con el objetivo de caracterizar los diferentes tipos de células presentes en esta población celular heterogénea e identificar las moléculas de adhesión implicadas en su adhesión. Se observó mayor presencia de células madre adherentes del estroma medular en las CMN obtenidas directamente de la MO; una mayor población de células CD90+ en las CMN procedentes de sangre periférica CD34-/CD45- con una elevada expresión de las moléculas CD44 y CD62L, lo que sugiere mayor presencia de células madre mesenquimales (CMM) en las células movilizadas del estroma medular. Los valores más elevados de células CD34+ en las células madre procedentes de sangre periférica con baja expresión de las moléculas CD117- y DR- sugiere la presencia de células madre hematopoyéticas, hemangioblastos y células progenitoras endoteliales movilizadas a la circulación periférica. Se demostró que tanto las CMN procedentes de MO como de sangre periférica, muestran una elevada expresión de células madre con expresión de la molécula de adhesión CD44 (marcador de CMM), probablemente implicadas en su migración, asentamiento y diferenciación

Regenerative medicine is a novel therapeutic method with broad potential for the treatment of various illnesses, based on the use of bone marrow (BM) stem cells, whose phenotypic characterization is limited. The paper deals with the expression of different cell membrane markers in mononuclear BM cells from 14 patients who underwent autologous cell therapy, obtained by medullary puncture and mobilization to peripheral blood, with the purpose of characterizing the different types of cells present in that heterogeneous cellular population and identifying the adhesion molecules involved in their adhesion. A greater presence was observed of adherent stem cells from the marrow stroma in mononuclear cells obtained directly from the BM; a larger population of CD90+ cells in mononuclear cells from CD34-/CD45- peripheral blood with a high expression of molecules CD44 and CD62L, which suggests a greater presence of mesenchymal stem cells (MSC) in mobilized cells from the marrow stroma. The higher levels of CD34+ cells in peripheral blood stem cells with a low expression of molecules CD117- and DR- suggests the presence of hematopoietic stem cells, hemangioblasts and progenitor endothelial cells mobilized to peripheral circulation. It was found that mononuclear cells from both the BM and peripheral blood show a high presence of stem cells with expression of adhesion molecule CD44 (MMC marker), probably involved in their migration, settling and differentiation

Experiencia cubana con el uso terapéutico de células madre adultas / Cuban experience with the therapeutic use of adult stem cells

Las investigaciones básicas y clínicas realizadas en los últimos años sobre las células madre y sus posibilidades terapéuticas, son en la actualidad uno de los temas más excitantes de la medicina contemporánea. Ya se han obtenido importantes avances en el estudio y aplicación de las células madre adultas que muestran notables ventajas sobre las embrionarias, pues su manipulación resulta más simple, económica y se pueden obtener del propio individuo que va a ser tratado. Para la introducción en Cuba de la terapia celular regenerativa, en el Instituto de Hematología e Inmunología se seleccionaron como fuentes celulares las células madre adultas derivadas de la médula ósea y las movilizadas a la sangre periférica. Para facilitar la extensión del tratamiento a otros centros hospitalarios, se estandarizó una técnica para la movilización de las células madre hematopoyéticas a la sangre periférica, mediante un factor estimulador de colonias de granulocitos (Filgrastim, de producción nacional) y se desarrolló un método simple, económico y también más tolerable para los enfermos. De esta forma, se ha extendido la terapia celular a 6 provincias cubanas y hasta abril del año 2009 se habían tratado 563 casos con trasplante de células madre adultas autólogas, de los cuales el 81,7 por ciento corresponde a pacientes con enfermedades angiológicas, en los que se ha logrado disminuir significativamente la indicación de amputaciones mayores. También los resultados han sido muy prometedores en las lesiones óseas y procesos periodontales, entre otras enfermedades tratadas. Los resultados obtenidos hasta el momento se pueden considerar como un nuevo logro de la ciencia revolucionaria y de nuestros sistemas nacionales de salud y de ciencia y técnica. El método empleado es un proceder económico y factible para instituciones con recursos limitados

The basic and clinical researches carried out during past years on the stem cells and its therapeutic possibilities are at present times, one of the most interesting subjects of the contemporaneous medicine. There are advances in the study and application of adult stem cells showing remarkable advantages on the embryonic ones, since its handling is more simple, economic and they are obtained from the own subject to be treated. For the introduction in Cuba of the regenerative cellular therapy in the Institute of Hematology and Immunology the cellular sources selected were the adult stem cells derived from bone marrow and the mobilized ones to the peripheral blood. To make easy the expansion of treatment to other hospital centers, authors standardized a technique for the mobilization of the hematopoietic stem cells to peripheral blood using a granulocyte colony-stimulating factor (Filgrastim, of national production) developing a simple, economic and more tolerable method for patients. In this way, the cellular therapy has been expanded to 6 Cuban provinces and until April, 2009 562 cases with autologous adult stem cells transplant have been treated, from which the 81.7 percent to correspond to patients presenting with Angiology diseases with a significant reduction of major amputations. Also, the results have been very promising in the bone lesions and periodontal processes among other diseases treated. The results obtained until now may be considered as a new achievement of revolutionary science and of our national health systems and of science and technique. The method used is an economic and feasible procedure for the institutions with scarce resources

Implante percutáneo de células mononucleares de sangre periférica movilizadas con factor estimulante de colonias granulocíticas, en la osteoartrosis de rodilla. Primer caso comunicado en Cuba / Percutaneous implantation of peripheral blood mononuclear cells mobilized with granulocyte colony stimulating factor in osteoarthritis of the knee. First case reported in Cuba

La enfermedad articular degenerativa, también conocida como osteoartrosis, afecta al 10 por ciento de los adultos mayores de 60 años de edad. Se caracteriza principalmente por dolor de la articulación afectada, crepitación, rigidez matinal y limitación progresiva de los movimientos de esa articulación. Todo esto conduce a un desgaste parcial o completo del cartílago articular. El tratamiento de la osteoartrosis de la rodilla constituye un gran desafío. Los avances recientes en el uso de la medicina regenerativa sugieren que las células madre adultas pudieran representar una alternativa promisoria en el tratamiento de esta enfermedad. En una paciente femenina de 61 años de edad con osteoartrosis de la rodilla, se realizó el implante percutáneo de células mononucleares autólogas movilizadas a la sangre periférica mediante el factor estimulante de colonias granulocíticas, y se logró una rápida mejoría clínica y radiológica. Este resultado sugiere que el proceder empleado es un método factible, simple, seguro y menos costoso, para el tratamiento de las lesiones degenerativas articulares

The degenerative joint disease, also known as osteoarthrosis affects to 10 percent of elderlies aged 60. It is mainly characterized by pain in the involved joint, crepitation, morning stiff and a progressive limitation of movement of that joint leading to a partial or total wear of articular cartilage. The treatment of the knee osteoarthrosis is a great challenge. The recent advances in use of regenerative medicine suggest that adult stem cells could represent a promisor alternative in the treatment of this entity. In a female patient aged 61 presenting with knee osteoarthrosis authors placed a percutaneous implant of autologous mononuclear cells mobilized to peripheral blood by granulocyte colony-stimulating factor achieving a fast clinical and radiological improvement. This result suggests that the procedure used is a feasible, simple, safe and less expensive method for treatment of articular degenerative lesions